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              通過血液分析儀準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板的基本方法介紹
              加入時間:2011-12-15 09:18:13  當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率:4844

                  普朗醫(yī)療器械公司知識——由于近些年,如何利用血液分析儀對外周血的血小板進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)已經(jīng)成為了業(yè)界的討論焦點(diǎn)和研究對象。專家也在不斷的探究新的方法和計(jì)數(shù)。然而就目前而言,最為主要和普遍的方法就是免疫學(xué)測定法和二維激光散射法。

                  1.免疫學(xué)測定法

                  本法早在1988年即由Aulter提出,但最近幾年才深入研究并見諸實(shí)用。Dickerhoff(1995)和Matzdorff(1998)應(yīng)用熒光標(biāo)記抗血小板膜糖蛋白抗體,用FCM法計(jì)數(shù)血小板;Davis(1999),Gill(2000)和Harrison(2000)等進(jìn)一步完善了這一方 法。所用的單抗,早期是抗CD41或CD42b,近來多用抗CD61,三種單抗效果相同。FCM方法都比較復(fù)雜,一般是先在流式血球儀上計(jì)數(shù)著染熒光的血 小板和計(jì)數(shù)紅細(xì)胞,先求出血小板/紅細(xì)胞之比值(下稱血小板比率),再用普通血液細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)同一患者的紅細(xì)胞數(shù)。然后以血小板比率×紅細(xì)胞數(shù)=血小板數(shù)。 Dickerhoff則改用已知其濃度的熒光微球代替紅細(xì)胞,先求出血小板/熒光微球之比值,再乘以熒光微球的濃度,即得到血小板數(shù)。上述方法都比較麻 煩,熒光微球價格高昂,難以在常規(guī)作中推廣使用。為此,Gill等改在Abbott公司的CELL-DYN4000型血液分析儀上,直接計(jì)數(shù)著熒光的血小 板,完全省去FCM法要先求血小板比率的步驟。由于用的是現(xiàn)成的儀器,而一般的血液分析儀,都已有一套成熟的操作、校準(zhǔn)和質(zhì)控系統(tǒng),故計(jì)數(shù)結(jié)果比較準(zhǔn)確, 可用于常規(guī)工作。
               
                  2.二維激光散射法

                  本法是最近幾年由Bayer公司研制的Advia 120型血液分析儀首先推出的。其設(shè)計(jì)原理是:根據(jù)同質(zhì)性球體光散射的Mie理論(Mie theory of light scatter for homogenenous spheres),當(dāng)球形化的血小板一個一個地通過激光照射區(qū)時,在兩個角度進(jìn)行測定:高角度(5°-15°)主要測細(xì)胞折射指數(shù)(refractive index,簡稱RI),它與細(xì)胞的密度有關(guān):低角度(2°-3°),主要是測細(xì)胞的大小。血小的體積在1-30fL,RI在1.35-1.40之間。由 于紅細(xì)胞含有高濃度的血紅蛋白,其折射指數(shù)高(Ri可達(dá)1.44),故大血小板雖然可能與小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、紅細(xì)胞殘骸(ghost)以及其它細(xì)胞碎 片的體積相似,但因?yàn)槿菸锊煌琑I相差較大,因二維散圖上可區(qū)別并分別計(jì)數(shù)。此法無需熒光標(biāo)記的抗體。也沒有繁瑣的預(yù)處理步驟,可以隨常規(guī)工作與其它血 細(xì)胞計(jì)數(shù)同進(jìn)進(jìn)行,使用十分方便。我們已應(yīng)用于實(shí)際工作中,效果甚好。

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