隨著科技的不斷發(fā)展，血紅蛋白測定的方法很多，包括比色法、比重法、血鐵法、血氧法等，其中以比色法為主，其實這也是血細胞分析儀的發(fā)展史。1966年ICSH就已推薦氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法為血紅蛋白測定的首選方法，既作為參考方法，也可常規(guī)使用。采用該法的醫(yī)療設(shè)備精確度和正確度都很高，最大答應(yīng)誤差為1%，其他方法如十二烷基硫酸鈉測定法、疊氮高鐵血紅蛋白法等都必須通過HiCN法校正其結(jié)果。以后ICSH又多次重申了該法。

    HiCN法是用HiCN轉(zhuǎn)化液與血紅蛋白反應(yīng)，除硫化血紅蛋白（SHb）外，其他血紅蛋白都被高鐵氰化鉀轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白（Hi），Hi再與氰離子反應(yīng)天生HiCN，該物質(zhì)有特征性吸收光譜，540nm處為最大吸收峰，在標準條件下，其吸光系數(shù)一定，用標準化的分光光度計測HiCN液的吸光度再換算成血紅蛋白濃度（g/L）。

    HiCN法必須待溶血和轉(zhuǎn)換反應(yīng)進行完全后才能進行測定，否則所得結(jié)果偏低。同時，測定前還要將HiCN溶液過濾，以除往顆粒雜質(zhì)，并對所使用的分光光度計以HiCN標準液進行校正，這是測定的關(guān)鍵之一。目前所用的國際HiCN標準液按Holtz制定的方法制備，其濃度為550~850mg/L，保持清潔無菌,性質(zhì)穩(wěn)定，其吸收光譜特征符合國際HiCN參考品的要求。