隨著高新技術(shù)的不斷出現(xiàn)，血細胞分析儀在檢測技術(shù)方面發(fā)生了較大變化，其中白細胞分類計數(shù)已由電阻抗法的三分類發(fā)展為同時使用多項技術(shù)聯(lián)合檢測白細胞，再由醫(yī)療設(shè)備綜合分析各項數(shù)據(jù)，可得出較正確的分類結(jié)果。這些技術(shù)包括體積分析、激光分析、高頻傳導(dǎo)分析、光散射分析和細胞化學(xué)等，但目前所用的普通血細胞分析儀仍不能對某些細胞進行正確識別，如白血病細胞、單核細胞、異常不典型淋巴細胞等。各類五分類血細胞分析儀的質(zhì)量保證有賴于參考方法的建立。目前，白細胞分類計數(shù)的參考方法仍然是手工分類法，即將血涂片進行瑞氏染色后，在顯微鏡下對各種白細胞進行分類。

      Hiibl等研究了使用流式細胞術(shù)進行白細胞五分類法，這種方法使用了三種熒光染料標記的單克隆抗體對不同白細胞進行染色：FITC標記的抗CD45,PE/CYS標記的抗CD14，PE標記的抗CD2、抗CD16、抗HLA-DR單克隆抗體混合物。根據(jù)各種白細胞表面抗原分布的不同對白細胞進行分類。

染色前先用細胞稀釋液破壞紅細胞，白細胞因表達CD45而與細胞碎片區(qū)分開。嗜酸性和嗜堿性粒細胞不能被PE標記的單克隆抗體混合物染色或染色較淺，且CD14陰性，而與其他細胞相區(qū)分，被框進LSS(側(cè)向光散射)/CD45直方圖內(nèi)。在LSS/CD45直方圖內(nèi)嗜酸性和嗜堿性粒細胞因表達CD45的強度不同及側(cè)向光散射特征存在差異而被分開。單核細胞表達CD14，同時結(jié)合其側(cè)向光散射特征而被框進LSS/CD14區(qū)。單核細胞以外的細胞根據(jù)側(cè)向和前向光散射（FS）特征差異而在LSS/FS直方圖中分為兩群，一群包括淋巴細胞和嗜堿性粒細胞，另一群包括中性粒細胞和嗜酸性粒細胞。從淋巴細胞、嗜堿性粒細胞中減往嗜堿性粒細胞即為淋巴細胞，從總數(shù)（100％）中減往嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞相對數(shù)，即得中性粒細胞相對數(shù)。

根據(jù)CD14區(qū)分單核細胞時，有少量CD14陰性單核細胞可被漏檢，而在區(qū)分嗜酸性粒細胞時，排除中性粒細胞是根據(jù)中性粒細胞表達CD16，若存在大量CD16弱表達的成熟中性粒細胞，則這部分中性粒細胞會干擾嗜酸性粒細胞計數(shù)，使嗜酸性粒細胞結(jié)果偏高，這種情況主要見于炎癥反應(yīng)。研究還發(fā)現(xiàn)，選擇不同的標本處理方法和流式細胞儀，固然所得結(jié)果相關(guān)性較好，但不同細胞亞群計數(shù)結(jié)果間的差異具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義，這體現(xiàn)了方法學(xué)選擇的重要性。流式細胞儀白細胞五分類法綜合運用多種細胞表面標志和光散射特征對白細胞進行識別，具有較高的特異性，其計數(shù)結(jié)果與手工分類法相關(guān)性較好，而且重現(xiàn)性遠遠優(yōu)于手工分類法，有看成為白細胞分類計數(shù)的參考方法。