酶聯(lián)免疫法是目前很常用的免疫學(xué)方法，實驗室標(biāo)準(zhǔn)化要求用酶聯(lián)免疫法測定抗原或抗體時，不論是定量還是定性都要求使用酶標(biāo)測定儀進行測定，測定時需要選擇單波長或雙波長。那你知道如何選擇酶標(biāo)測定儀的單波長和雙波長嗎？

選擇單波長測定就是選擇一個測定波長，直接測定樣本的吸光度，而雙波長測量是采用兩個不同的波長，即測定波長（又叫主波長）和參比波長（又叫次波長）同時測定樣品的吸光度，以消除一些外在影響因素，提高酶標(biāo)測定儀檢測結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度，但在日常工作中往往忽略對單波長和雙波長的選擇。

酶標(biāo)測定儀在用單波長測定吸光度時，除受到測定干擾（樣本的濁度、干擾色等）和電路干擾（包括噪音、漂移、電壓等）等因素外，受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中，由于液體表面張力的作用，液體的表面不是一個平面，而是形成一個凹面，從側(cè)面看似凹透鏡，這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響，光線在通過液體時，除正常被液體吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光線通過凹透鏡那樣），影響吸光度的檢測。而酶標(biāo)測定儀使用的又是通過光導(dǎo)纖維傳播的點光源，如果每次能在同一部位檢測，吸光度的重復(fù)性將得到保證，但由于機械運動等造成的誤差，不可能保證每孔都在相同部位被檢測，因此造成了孔與孔之間有一定的差異。

雙波長的測定采用兩個不同的波長同時測定一個樣本的吸光度，它們的差值是樣本相對準(zhǔn)確的吸光度，這樣就大大減少了測定干擾和電路干擾，因此測定結(jié)果明顯好轉(zhuǎn)。

在酶聯(lián)免疫法測定抗原、抗體時，常用的底物四甲基苯胺或鄰苯二胺，顯色終止后，在630nm處的吸光度值都只有在450nm處吸光度值1%左右，因此利用雙波長檢測不會影響靈敏度，反而可以減少其他因素的影響。

醫(yī)療器械小編建議：酶聯(lián)免疫法比色首要選擇雙波長，這樣可以提高臨界值附近標(biāo)本結(jié)果判定的準(zhǔn)確度，減少實驗誤差。