測定原理

AC900+三分群血液分析儀采用電阻抗法，檢測原理是：根據血細胞相對非導電的性質，懸浮有電解質溶液中的血細胞顆粒，在通過計數小孔時可引起電阻的變化為基礎，對血細胞進行計數和體積測定。

1、檢測原理：將等滲電解質溶液（被稱為稀釋液,diluents）稀釋的細胞懸液置入一個不導電的容器中，將小孔管(也稱傳感器transducer)插到細胞懸液中。小孔管是電阻抗法細胞計數的一個重要的組成部分，其內側充滿了稀釋液，并有一個內電極，外側細胞懸液中有一個外電極。檢測期間，當電源接通后，位于小孔兩側的電極產生穩定的電流；稀釋液通過小孔的管壁上固有的小孔（直徑一般<100μm.厚度為75μm左右）向小孔內部流動。此時，小孔周圍充滿了具有導電性的液體，其電子脈沖是穩定的。如果供給電流I和阻抗R是穩定的，根據歐姆定律通過小孔的電壓V是不變的（這時V=IR）。當有細胞通過小孔時，由于細胞的導電性質比稀釋液要低，在電路中小孔感應區內的電阻的增加，于是瞬間引起了電壓變化而出現一個脈沖信號。電壓增加的變化的程度取決于非傳導的細胞占據小孔感應區的體積，即細胞體積越大，引起的脈沖越高，產生的脈沖振幅越高，測定脈沖的大小即可測出細胞體積大小，記錄脈沖的數量就可測定細胞的數量。。脈沖信號經過下列步驟，得出細胞計數結果。

（1）信號發生器：通過小孔的各種血細胞都能產生電阻信號，信號電平的高低與細胞的大小成正比。

（2）放大：由于血細胞通過微孔時產生的脈沖訊號非常微弱，不能直接觸發計數電路，因此必須通過電子放大器，將微伏訊號放大為伏級脈沖訊號。

（3）閾值調節：在計數不同細胞時，應調節閾值電平，以給出合適的閾值度，使計數結果盡量符合實際水平。

（4）甄別：通過微孔時的各種微粒（血細胞、細胞碎片、雜質等）均可產生相應脈沖訊號，訊號電平（脈沖幅度）與微粒大小成正比。因除血細胞外，血中細胞外，血中細胞碎片、稀釋液中雜質微粒均可產生假訊號，使計數結果偏高。所謂甄別就是利用甄別器根據閾值調節器提供的參考電平，將低于參考電平的假訊號去掉，以提高細胞計數的準確性。

（5）整形器：經過放大和甄別后的細胞脈沖訊號波形尚不一致必須經過整形器作用，修整為形伏一致標準的平頂波后，才能觸發電路。

（6）計數：血細胞的脈沖信號，經過放大、甄別、整形后，送入計數系統；血液分析儀對大小不同的脈沖進行選擇，區分出不同類型的細胞并分別進行計數。

2、白細胞計數和分類計數原理：根據電阻抗的原理，不同體積的白細胞通過小孔時產生的脈沖大小有明顯的差異，依據這些脈沖的大小，可對白細胞進行分群。

經過溶血劑處理后的白細胞可以根據體積大小初步確認其相應的細胞群：第一群是小細胞區(LYMF)，指細胞體積在35-90fl之間的小細胞區，主要分布的是淋巴細胞；第二群是單個核細胞區，也被稱為中間細胞（MID），指細胞體積在90-160fl之間的中間細胞區，主要包括單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞，核左移的各階段幼稚細胞或白血病時白血細胞。。第三群是大細胞區，主要是中性粒細胞（GRAN），指細胞體積在160fl以上的大細胞區，主要分布的是中性粒細胞。儀器根據各亞群占總體的比例計算出各亞群的百分率，如果與該標本的白細胞總數相乘，即得到各類細胞的絕對值。可以看出，電阻法只是根據細胞體積的大小，將白細胞分成幾個群體。

3、紅細胞數和血細胞比容測定：絕大多數血液分析儀使用電阻抗法進行紅細胞計數和紅細胞比積測定，其原理同白細胞一樣。紅細胞通過小孔時，形成的相應的脈沖的多少即紅細胞的數目，脈沖的高度代表單個脈沖細胞的體積。脈沖高度疊加經換算即可得到紅細胞的比容。稀釋的血液進入紅細胞檢測通道時，其中含有白細胞，因此，紅細胞檢測的各項參數均含有白細胞因素，但正常血液有形成分中白細胞比例很少約為500：1-700：1，故其影響可忽略不計，但在病理情況下，如白血病，白細胞數明顯增加而又伴嚴重貧血時，即可使所得各項參數產生明顯誤差。血細胞比容，通常用紅細胞平均體積（MCV）與紅細胞相乘得出紅細胞比積HCT=MCV×RBC。

4、血紅蛋白測定：當稀釋的血液加入溶血劑后，紅細胞溶解并釋放血紅蛋白，Hb與溶血劑中的某些成分結合形成血紅蛋白衍生物，進入血紅蛋白測試系統，在特定波長（一般在530-550nm）下比色；吸光度的變化與液體中Hb含量成比例，儀器便可顯示HGB濃度。不同系列血液分析儀配套溶血劑配方不同，形成的血紅蛋白衍生物亦不同，吸光度各異但最大吸收峰均接近540nm .這是因為ICSH推薦的氰化高鐵法，HICN最大吸收峰在540nm。校正儀器必須以HICN值為標準。大多數系列血液分析儀溶血劑內均含有氰化鉀，與血紅蛋白作用后形成氰化血紅蛋白（注意不是氰化高鐵血紅蛋白），其特點是顯色穩定，最大吸收峰接近540nm，但吸收光譜與HICN有明顯的不同。此點在血液分析儀校正時應十分注意。

5、紅細胞其他參數的檢測：　紅細胞平均值，如紅細胞平均體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白量（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、均是根據儀器檢測導出（MCV），或由檢測的紅細胞數和血紅蛋白含量的檢測數據，經計算得到，MCH=HGB÷RBC　MCHC=HGB÷HCT HCT=MCV×RBC。紅細胞體積分布寬度（RDW）則是由血液分析儀測量細胞體積后獲得的，是反映外周血紅細胞體積異質性的參數，即反映紅細胞大小不等的客觀指標。當紅細胞通進小孔的一瞬間，計數電路得到一個相應的大小的脈沖，脈沖的高度是由細胞體積大小決定的，不同大小的脈沖的信號分別貯存在儀器內裝計算機的不同通道內，計算出相應的體積及細胞數后，統計處理而得RDW 值。由于RDW 來自十幾秒內近萬個紅細胞的檢測數據，不但可以克服測量紅細胞直徑時人為制片因素和主觀因素等影響。

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6、電阻抗法血小板檢測原理  血小板（platelet, PLT）隨紅細胞一起在一個系統中進行檢測，當各種細胞引起電阻變化，產生的脈沖經數字化后，根據不同的閾值，計算機分別給出血小板和紅細胞數目。血小板分別儲存于64個通道，直方圖范圍在2-28fl，。血小板平均體積（mean platelet volume, MPV）就是PLT體積分布的直方圖的產物。