為提高抗原和抗體檢測的敏感性，將已知抗體或抗原標記上易顯示的物質，通過檢測標記物，反映有無抗原抗體反應，從而間接測出微量的抗原或抗體。常用的標記物有酶、熒光素、放射性同位素、膠體金及電子致密物質等。這種抗原或抗體標記上顯示物所進行的特異性反應稱為免疫標記技術(immunolabelling technique)。

　　免疫標記不僅大大提高了試驗敏感性，若與光鏡或電鏡技術相結合，能對組織或細胞內的待測物質作精確定位，從而為基礎與臨床醫學研究及診斷提供方便。免疫標記技術大致分為兩大類：一類屬于免疫組織化學技術(immunohistochemical technique)，用于組織切片或其他標本中抗原的定位。另一類稱為免疫測定(immunoassay)，用于液體標本中抗原或抗體的測定。

　　免疫酶技術(immunoenzymatic technique) 最早應用的免疫酶技術是免疫酶組織化學染色，即用標記的抗體與標本中的抗原發生特異性結合，當加入酶的底物時，在酶的作用下經一系列生化反應產生有色物質，借助光鏡作出定位判斷。目前，應用最廣泛的是酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)。該法特異性強，敏感性高，既可檢測抗體，又能測定可溶性抗原。

ELISA常采用的酶為辣根過氧化物酶(hosradish peroxidase，HRP)，其底物是二氨基苯胺(DAB)，底物被分解則呈棕褐色，可目測或借助酶標儀比色。ELISA為非均相免疫測定，另外還有均相法，在此不作介紹。

　　由于酶免疫測定無需特殊儀器和試劑，且操作簡便，利于普及。因此，在免疫標記技術中，該法應用最為廣泛，并在原有方法基礎上加以改良，使得眾多新的，更敏感的方法應運而生。①生物素-親和素放大系統(biotin-avidin system，BAS)，建立于70年代后期，通過將酶標記在生物素或親和素上，借助生物素與親和素的高度親力和生物素能與抗體結合的特點應用于ELISA，顯著提高了檢測的敏感性。②雙表位ELISA(two-site ELISA)，其方法同雙抗體夾心法，只是將包被的抗體和酶標抗體換成針對兩個不同抗原決定簇的單抗，用于檢測單抗的親和性及表位特異性，亦可用于標本中抗原的快速檢測，即在試驗時可將待測抗原與酶標單抗同時加入反應體系，減少檢測步驟。③斑點免疫滲濾試驗(dot immunofiltration assay，DIFA)，其原理與ELISA相同，但以微孔膜(如硝酸纖維素膜、尼龍膜等)代替聚苯乙烯板作載體。試驗時，將包被有抗原或抗體的微孔濾膜貼置于吸水材料上，依次滴加的標本、酶結合物、底物，分別進行洗滌，多余的標本和酶標抗體及洗滌液等可滲濾入吸水材料中，最后陽性標本在膜上呈現著色斑點。④酶聯免疫電轉移印漬法(enzyme linked immunoelectrotransferblot，ELIB)，該法將免疫轉印技術與酶標技術相結合，有利于分析和檢測更加復雜的抗原成分。ELIB分三階段進行。

第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，先將抗原分成不同的區帶(肉眼不可見)；

第二階段為轉移電泳，即將凝膠上的電泳區帶經電泳轉移至硝酸纖維素膜上；

第三階段為酶免疫定位，用特異性抗體和酶標抗抗體作間接ELISA，結果陽性區帶呈顯色反應。

文章來源---酶標儀生產廠家普朗醫療網編發表（http://www.vkflhm.cn）轉載請保留鏈接！