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              酶標儀通道差與孔間差檢測問題剖析
              加入時間:2012-08-15 14:42:56  當前新聞點擊率:6042
              酶標儀通道差與孔間差檢測問題剖析,具體內容如下所示:
              一、酶標儀通道差檢測:取一只酶標板(酶標板是通過洗板機來清洗的,一般是輔助酶標儀使用實現蛋白含量測定的醫療器械)小孔杯(杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染)以酶標板架作載體,分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8個通道的相應位置,蒸餾水調零,采用雙波長(測定波長490nm,參比波長630或650nm,以下均相同)連續測三次,觀察其不同通道之間測量結果的一致性可用極差值來表示其通道差。
              為了提高酶標儀的檢測速度,根據 96孔酶標板的規格特點,目前大多數廠家的中、高檔酶標儀均采用8通道的檢測器(部分中、低檔酶標儀目前仍采用單通道)。因而它們每個通道的檢測能力是不盡相同的,它是儀器內部的固有誤差,與所測溶液濃度成正相關(不同檢測器對不同濃度溶液的響應能力不同),所以通道差是衡量酶標儀性能良好與否的重要指標之一;其衡量指標用極差表示,這與廠家推薦的指標是一致的;極差值越接近于零,通道差越小,說明同一樣品于不同通道檢測結果的一致性越好。
              二、酶標儀孔間差的測量:選擇同一廠家、同一批號酶標板條(8條共96 孔)分別加入200 ul甲基橙溶液(吸光度調至0.065~ 0.070 A)先后置于同一通道,蒸餾水調零,采用雙波長檢測,其誤差大小用±1.96s衡量。
                由于不同廠家、不同批號酶標板之間的質量差異,導致孔與孔之間的檢測結果也不完全一致,這與水平光路光度計的比色皿質量是否符合要求一樣,因此我們認為孔間差是酶標儀外部的固有誤差,只有準確測知孔間差,并對結果作出相應的校正,才能使檢驗結果更符合實際情況、更準確可靠;采用的評價指標(士1.96 s)也是有利于結果校正的。另外,在設計孔間差測量的操作方法上,我們將200 ul甲基橙溶液吸光度調至 0.065~0.070 A,是充分考慮到加樣器的誤差,其目的是使加樣誤差控制在酶標儀的分辨率(0.01 A)以下,這樣也就避免了孔間差結果不因加樣誤差而導致假性增高。
               
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