酶標儀在用單波長測定吸光度時，除受到測定內源性干擾（包括噪音、漂移、電壓等）因素外，受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中，由于液面表面張力的作用，液體的表面不是一個平面，而是形成一個凹面，從側面看似凹透鏡，這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響，光線在通過液面時，除正常的被液體吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光線通過凹透鏡那樣），影響吸光度的檢測。而酶標儀使用的又是通過光導纖維傳播的點光源，如果每次能在同一部位檢測，吸光度的重復性將得到保證，但由于機械運動等造成的誤差，不可能保證每孔都在相同部分被檢測，因此造成了孔與孔之間有一定的差異。

    在雙波長測定中，減少了測定干擾和電路干擾，因此測定結果明顯好轉。由于液體表面張力的不同，導致單波長測定時誤差較大。并且用不同的洗滌劑會影響到最后加入底物和終止液后的液面情況，醫學教育`網搜集整理用加入表面活性劑的洗滌劑清洗后，形成的液面更凹，對單波長檢測的影響更大，并且與表面活性劑的濃度成正比。而用中性蒸餾水洗滌后，單、雙波長檢測技術結果基本一致。

    在酶聯免疫法測定抗原、抗體中，常用標記酶辣根過氧化物酶所使用的底物一般是鄰苯二胺或四甲基聯苯胺，顯色終止后，二者在630nm和655nm處的吸光度值都只在吸收峰處（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用雙波長檢測，不會影響酶標儀檢測的靈敏度。建議在進行酶聯免疫檢測時，酶標儀比色應該首先雙波長。這樣可以提高臨界值處標本的分析準度，減少實驗誤差。

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