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              酶標(biāo)儀檢查瘦肉精操作步驟
              加入時(shí)間:2011-11-18 10:25:05  當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率:5196

              酶標(biāo)儀檢查瘦肉精操作步驟如下:第一步:所有試劑及樣品在開始檢測前必須回升至室溫(20-24℃),測定操作在20-24℃下進(jìn)行。

                第二步:用盒中緩沖液以體積1﹕10的比例稀釋實(shí)際用量的克侖特羅抗體濃縮液(黑色蓋),稀釋前輕輕混均抗體,不要猛烈振蕩。

                第三步:取出實(shí)驗(yàn)需要數(shù)量的微孔板條,足夠標(biāo)準(zhǔn)和樣品所用的數(shù)量,標(biāo)準(zhǔn)和樣品做兩個(gè)平行試驗(yàn),記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品的位置。剩余的微孔板條放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,置于2-8℃冷藏。

                第四步:每個(gè)微孔中底部加100μl稀釋后的抗體溶液,室溫(20-24℃)孵育微孔板15 min,避免光線照射。

                第五步:孵育的同時(shí)進(jìn)行酶標(biāo)記物的稀釋,用盒中緩沖液以體積1﹕10的比例稀釋實(shí)際用量的克侖特羅酶標(biāo)記物濃縮液(紅色蓋),稀釋前輕輕混均抗體,不要猛烈振蕩,避光放置。

                第六步:洗板,甩出孔中液體,將微孔架倒置在吸水紙上拍打,直到紙上無明顯水跡(拍打3次),以保證完全除去孔中的液體。用250μl蒸餾水充入孔中,再次甩掉微孔中液體,并在吸水紙上拍打,重復(fù)操作兩次。加洗滌水的移液器管尖必須置于微孔上方約0.5 cm處打出洗滌水,避免將板孔中的游離抗體帶入洗滌水中。洗板后立即進(jìn)行下一步操作,不要讓板孔干燥。

                第七步:加入20μl標(biāo)準(zhǔn)或處理好的樣品到各自的微孔底部,標(biāo)準(zhǔn)和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。

                第八步:加入100μl稀釋了的酶標(biāo)記物至微孔底部,輕輕震蕩微孔析并在桌面上作圓周運(yùn)動以混勻。移液器管尖不要接觸到孔中的混合物,避免交叉污染。

              第九步:室溫孵育微孔板30 min,避免放置,盡可能每隔10 min輕輕振蕩1次,準(zhǔn)備好酶基質(zhì)/發(fā)色劑,并注意避光放置。

                第十步:洗板,同第六步。在洗板過程中加洗滌水的移液器置于微孔板上方0.5 cm處打出洗滌水,避免將板孔中的游離酶標(biāo)記物帶入洗滌水中。

                第十一步:不要讓板孔干燥,迅速加入100μl酶基質(zhì)/發(fā)色劑到每個(gè)孔中,步驟操作要迅速,避免頭尾反應(yīng)時(shí)間相差過長,輕輕振蕩板并在桌面上作圓周運(yùn)動以混勻。移液器管尖不要接觸微孔中的混合物,避免交叉污染。

                第十二步:室溫暗處孵育微孔板15 min,暗處避光放置,同時(shí)準(zhǔn)備好反應(yīng)停止液。

                第十三步:每孔加入100μl反應(yīng)停止液,混勻,60 min內(nèi)用酶標(biāo)儀測量450 nm處波長吸光度值。

                八、結(jié)果

                所獲得的標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸光度值的平均值除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值再乘以100,并且以百分比的形式給出吸光度值。

                吸光度值(%)= ×100

                計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)值(吸光度值)繪成一個(gè)對應(yīng)克侖特羅濃度(mg/kg)的半對數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)曲線圖,校正曲線在200-2000 ng/kg范圍內(nèi)應(yīng)當(dāng)成為線性。相對應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度(ng/kg)可以從校正曲線上讀出

              本文由酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家普朗醫(yī)療網(wǎng)編發(fā)表,轉(zhuǎn)載請注明出處!

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