酶標(biāo)儀檢查瘦肉精操作步驟如下：第一步：所有試劑及樣品在開始檢測(cè)前必須回升至室溫（20-24℃），測(cè)定操作在20-24℃下進(jìn)行。

　　第二步：用盒中緩沖液以體積1﹕10的比例稀釋實(shí)際用量的克侖特羅抗體濃縮液（黑色蓋），稀釋前輕輕混均抗體，不要猛烈振蕩。

　　第三步：取出實(shí)驗(yàn)需要數(shù)量的微孔板條，足夠標(biāo)準(zhǔn)和樣品所用的數(shù)量，標(biāo)準(zhǔn)和樣品做兩個(gè)平行試驗(yàn)，記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品的位置。剩余的微孔板條放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，置于2-8℃冷藏。

　　第四步：每個(gè)微孔中底部加100μl稀釋后的抗體溶液，室溫（20-24℃）孵育微孔板15 min，避免光線照射。

　　第五步：孵育的同時(shí)進(jìn)行酶標(biāo)記物的稀釋，用盒中緩沖液以體積1﹕10的比例稀釋實(shí)際用量的克侖特羅酶標(biāo)記物濃縮液（紅色蓋），稀釋前輕輕混均抗體，不要猛烈振蕩，避光放置。

　　第六步：洗板，甩出孔中液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打，直到紙上無明顯水跡（拍打3次），以保證完全除去孔中的液體。用250μl蒸餾水充入孔中，再次甩掉微孔中液體，并在吸水紙上拍打，重復(fù)操作兩次。加洗滌水的移液器管尖必須置于微孔上方約0.5 cm處打出洗滌水，避免將板孔中的游離抗體帶入洗滌水中。洗板后立即進(jìn)行下一步操作，不要讓板孔干燥。

　　第七步：加入20μl標(biāo)準(zhǔn)或處理好的樣品到各自的微孔底部，標(biāo)準(zhǔn)和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。

　　第八步：加入100μl稀釋了的酶標(biāo)記物至微孔底部，輕輕震蕩微孔析并在桌面上作圓周運(yùn)動(dòng)以混勻。移液器管尖不要接觸到孔中的混合物，避免交叉污染。

第九步：室溫孵育微孔板30 min，避免放置，盡可能每隔10 min輕輕振蕩1次，準(zhǔn)備好酶基質(zhì)/發(fā)色劑，并注意避光放置。

　　第十步：洗板，同第六步。在洗板過程中加洗滌水的移液器置于微孔板上方0.5 cm處打出洗滌水，避免將板孔中的游離酶標(biāo)記物帶入洗滌水中。

　　第十一步：不要讓板孔干燥，迅速加入100μl酶基質(zhì)/發(fā)色劑到每個(gè)孔中，步驟操作要迅速，避免頭尾反應(yīng)時(shí)間相差過長(zhǎng)，輕輕振蕩板并在桌面上作圓周運(yùn)動(dòng)以混勻。移液器管尖不要接觸微孔中的混合物，避免交叉污染。

　　第十二步：室溫暗處孵育微孔板15 min，暗處避光放置，同時(shí)準(zhǔn)備好反應(yīng)停止液。

　　第十三步：每孔加入100μl反應(yīng)停止液，混勻，60 min內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)量450 nm處波長(zhǎng)吸光度值。

　　八、結(jié)果

　　所獲得的標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸光度值的平均值除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值再乘以100，并且以百分比的形式給出吸光度值。

　　吸光度值（％）＝ ×100

　　計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)值（吸光度值）繪成一個(gè)對(duì)應(yīng)克侖特羅濃度（mg/kg）的半對(duì)數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)曲線圖，校正曲線在200-2000 ng/kg范圍內(nèi)應(yīng)當(dāng)成為線性。相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度（ng/kg）可以從校正曲線上讀出

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