一、通過(guò)血細(xì)胞分析儀對(duì)血小板計(jì)數(shù)方法的評(píng)價(jià)與意義

    關(guān)于免疫法和二維法這兩種方法的準(zhǔn)確性，各有關(guān)作者均作過(guò)詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)對(duì)比和評(píng)價(jià)。Harrison等分析了血小板數(shù)在4-794×109 /L的87份標(biāo)本，用FCM（下稱(chēng)免疫學(xué)法）計(jì)數(shù)并與參考（手工）方法和二維激光散射法（用Advia 120型儀器），以及以為基礎(chǔ)的儀器等作了對(duì)比，結(jié)果血小板數(shù)>100×109 /L的標(biāo)本，免疫方法與參考方法和各類(lèi)均有很好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r2=0.98-0.99;但血小板數(shù)<100×109 /L的標(biāo)本，免疫學(xué)方法與三種的相關(guān)系數(shù)r2=0.87，0.90和0.91，而與血液細(xì)胞分析儀的相關(guān)系數(shù)r2仍達(dá)0.96。表明在血小板減少的標(biāo)本，免疫學(xué)方法與二維激光散射法有較高的一致性，而與阻抗法相差較大。該作者遇見(jiàn)一份重度的 脂血癥標(biāo)本，用三種阻抗法計(jì)數(shù)，血小板分別為135、103和193×109 /L，而用免疫法計(jì)數(shù)，僅為43×109 /L，用血液細(xì)胞分析儀為59×109 /L。Gill等在儀器上，以抗 CD61熒光標(biāo)記法計(jì)數(shù)血小板，并與一般的光散射法和阻抗法對(duì)手工參考方法進(jìn)行了比較，結(jié)果熒光單抗法與參考方法的相關(guān)系數(shù)r2=0.97，光散射法與參 考方法的相關(guān)系數(shù)r2=0.94,阻抗法與參考方法的相關(guān)系數(shù)r2=0.85。在精密度方面，也顯示免疫法的優(yōu)越性。

    Kunicka等對(duì)二維激光散射法計(jì)數(shù)血小板的準(zhǔn)確性，也進(jìn)行了詳細(xì)的比較和評(píng)價(jià)。Kunicka等將260份血小板在2-1000×109 /L的血樣標(biāo)本將本法與手工參考方法比較（手工法是由二名有經(jīng)驗(yàn)的技師各計(jì)數(shù)一塊血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的兩個(gè)計(jì)數(shù)室，以總平均數(shù)報(bào)告），其相關(guān)系數(shù) r2=0.975；而與 一維法（即和一般 的光散射法）的相關(guān)系數(shù)r2=0.886。值得指出的是，在重度貧血、白血病、MDS、DIC和各種血小板減少的病例，經(jīng)常出現(xiàn)NPPs，手工法和各種一 維法計(jì)數(shù)結(jié)果往往偏高。Kunicka等出了100份血小板低于50×109/L的血樣，將二維法與手工法進(jìn)行比較，結(jié)果相關(guān)系數(shù)r2=0.833，遠(yuǎn)低 于血小板數(shù)正常的標(biāo)本。Chapman等用Advia 120 的二維儀器計(jì)數(shù)血小板，認(rèn)為它有很高的準(zhǔn)確性，可減少65%的人工復(fù)查率（review rate ）,從而節(jié)省了可觀的經(jīng)費(fèi)。
    除了各種非血小板顆粒的存在，使血小板計(jì)數(shù)偏高以外，大血小板和血小板聚集（clump）的存在，是導(dǎo)致阻抗法和一般光學(xué)法計(jì)數(shù)偏 低的主要原因。它們往往因?yàn)轶w積過(guò)大而被當(dāng)作紅（白）細(xì)胞加以計(jì)數(shù)。在染色的血涂片上，由血球儀研究：一般正常血小板的直徑在1-4μm，Gill等將血涂片上的大型血 小板，分為大血小板（macrolpatelet,直徑4-6μm）和巨血小板（giantplatelet,直徑6μm以上）兩類(lèi)，在Advia 120儀上，將體積在20fL以上者，定為大血小板，并報(bào)告其數(shù)量。關(guān)于大血小板的參考值及臨床義，目前報(bào)道尚少，值得進(jìn)一步研究。

    二、存在的問(wèn)題

    盡管免疫法和二維法有很多優(yōu)點(diǎn)，但還不能說(shuō)已盡善盡美。

    免疫法  無(wú)論是FCM還是用CELL-DYN儀計(jì)數(shù)，都要用昂貴的熒光標(biāo)記單抗和高檔的血液分析儀器，以及較繁瑣的前處理，故僅適用于特殊的病例或用于方法和校準(zhǔn)儀器，難 以在常規(guī)工作中普遍推廣。此外，有些血小板膜糖蛋白先天缺陷的患者（如Glanzmann 血小板無(wú)力癥），因膜上不表達(dá)CD61等抗原，就不能用免疫法計(jì)數(shù)。

    二維法  盡管它不需特殊試劑和儀器，對(duì)NPPs特別是對(duì)大血小板的分辨力強(qiáng)，但對(duì)白細(xì)胞碎片與血小板的鑒別能力如何，尚研究不夠。這些碎片，大小可能與血小板相 似，但折射率是否像紅細(xì)胞樣有區(qū)別還不太清楚。此外，本法區(qū)分聚集的血小板的能力，顯然不及免疫法。由于血小板聚集過(guò)程需要鈣離子，因此用除鈣的抗凝劑抗 凝分混勻血液（和制血涂片），一般不會(huì)出現(xiàn)血小板聚集。但應(yīng)注意有極少數(shù)的人的血小板，在用EDTA抗凝時(shí)，反充會(huì)出現(xiàn)聚集。這種依賴(lài)EDTA的血小板聚 集現(xiàn)象，有人稱(chēng)其為“EDTA聚集者（EDTA Clumper）”,此時(shí)只能換用非EDTA抗凝劑（如枸櫞酸鈉）進(jìn)行計(jì)數(shù)。通常所謂的血小板聚集，是指血小板與血小板之間互相粘附，此時(shí)一般血液分析儀 會(huì)將其誤認(rèn)作紅、白細(xì)胞而加以計(jì)數(shù)，導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)偏低。另有一種現(xiàn)象是血小板粘附于白細(xì)胞上，稱(chēng)為”血小板衛(wèi)星現(xiàn)象（platelet satellitism）”,亦會(huì)使血小板假性偏低。

    間接法  目前用于評(píng)價(jià)血小板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性的“參考方法”是手工法，其本身不但精密度較差，而且在鏡下也往往難以準(zhǔn)確辨別血小板與某些NPPs，準(zhǔn)確性也不夠高，但又 沒(méi)有可代替的更好的方法。為了驗(yàn)證和比較各種方法的準(zhǔn)確性，Kunicka等提出，增加一項(xiàng)在血涂片上間接計(jì)數(shù)血小板的方法作為補(bǔ)充。該法是用抗凝血液推 一血片，經(jīng)氏染色后，在厚薄適中處計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞并同時(shí)計(jì)數(shù)所見(jiàn)到的血小板，求得血小板/紅細(xì)胞之比值。再將此比值×紅細(xì)胞數(shù)（通過(guò)一般血細(xì)胞分析儀數(shù)得），求得血小板數(shù)。此法雖不十分精確，但可以從另一側(cè)面，直觀地“間接”計(jì)數(shù)血小板，還可觀察血小板的大小、形態(tài)、有無(wú)聚集及聚集體大小等等，是一種 簡(jiǎn)單、易行的方法。

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