試劑及方法學在生化分析儀中的應用
加入時間:2014-05-14 11:34:36 當前新聞點擊率:2484
生化分析儀目前在我國的應用已經非常廣泛,但不少人對其相關知識了解的并不多,導致在操作過程中產生不少誤會,縮短了醫療設備的使用壽命。下面普朗小編給大家詳細介紹下試劑及方法學在生化分析儀中的應用,讓大家對生化分析儀有更多的認識:
試劑組成在酶活性的連續監測法時,若試劑含工具酶數量多、偶聯反應多,則激活反應時間一般較長,延遲時間也較長,如肌酸激酶(NAC法)延遲時間常設置120-180秒;若試劑中底物經待測酶催化,其產物可以直接測定的,則延遲時間較短,如 -谷氨酰轉移酶(GGT)設定30-60秒。同一項目同一方法,但試劑配方不同,其反應快慢等特征也可能不同,如白蛋白測定。白蛋白與溴甲酚綠(BCG)為即時反應,10秒鐘內已完成,其后球蛋白等也將與BCG發生反應,所以孵育時間不能延長。但在同一測定時間,BcG濃度、緩沖液種類、pH和表面活性劑不J司的試劑,測定結果可能差異明顯。
樣品異常成分干擾有的試驗項目需要用工具酶將內源性代謝產物耗盡,比如丙氨酸氨基轉移酶活性測定試劑中須有足量的乳酸脫氫酶(LDH)。如果使用單試劑,正常血清樣品延遲時間60秒即可;但當內源性酮酸增多(如酮癥酸中毒)時,試劑內LDH常常不能在60秒內完全將其清除,剩余酮酸會進入監測期干擾測定,使測定結果偏高,所以延遲時間應增至90~120秒。采用雙試劑,則可在加入R1后即進入預孵育期。
方法學要求比如肌酐(Jaffe法)測定的特異性不強,一般認為反應前20秒左右為乙酰乙酸等快反應干擾物呈色,后約80~100秒為蛋白質等慢反應假肌酐呈色,20~60秒肌酐呈色反應占主導地位。采用兩點法或速率法可減少干擾,但具體取多長的延遲時間,應根據試劑和儀器讀數特點,以干擾試驗等方法來評價決定。
工作程序,要在保證準確性的前提下,合理設置參數,提高工作效率。最突出的例子是半自動生化儀上酶活性連續監測法的延遲時間設定。由于只能單份樣品逐一測定,若延遲時問全部設置在儀器內,每個延遲時間加監測時間至少1分鐘以上,守候時間較長。工作量大時,可以根據儀器控溫、加樣及讀數和試劑特點,以及室溫情況,將延遲時問挪一部分到機外,套式操作,但要確保機內延遲時間不要進入線性反應期。