生化分析儀-樣品量、試劑量與稀釋量設置方法
加入時間:2014-05-14 15:07:25 當前新聞點擊率:4251
生化分析儀有關參數包括樣品量、試劑量、稀釋水量、最小反應體積和最大比色杯容量等。如HITACHI7170反應體積180~380μl,最大體積570μ l。BT 224半自動生化儀流動比色池容積33μl,吸液量200~990μl,最適體積500μl。
1.最小反應體積 在醫療設備光度讀數要用于結果計算時,反應液液面高度不低于光度計光徑的最小體積。它保證儀器的正確讀數和計算,也是儀器測定精度和經濟性的指針之一。在有的儀器中,它以反應體積的下限表示,有的則專門標明最小反應體積。在單試劑測定中,樣品與試劑的總體積不得少于此參數。在雙試劑測定中,若R1與樣品的反應讀數不納入結果計算。R1自勺加液量可不考慮此參數,如連續監測法;否則應考慮它對結果的影響,如終點法在加R2之前讀數,并以此來扣除試劑或樣品空白時。
在半自動生化儀中,最適吸人量相當于最少反應體積。它與進液管道長度、流動比色池容積,吸液泵抽吸力大小和液體黏稠度有關,它要保證光度檢測不受空泡和前后樣品攜帶污染的干擾。因此,吸人體積不能任意降低,必要時,應加大反應液量和吸人量。
2.最大比色杯容量 這個參數含義明確。在有的儀器中,它以反應體積的上限表示,有的則專門標明最大比色杯容量。反應液超過此體積,將致液體外溢,儀器測定系統被污損。
3.樣品試劑比例樣品與試劑的比例(SV:RV),也可表示為樣品體積分數——樣品體積與反應液總體積的比值(SV/TV),是方法學基本參數。酶活力測定中,樣品在總體積中的比例應在10%以下。一般來說,待測物質在樣品中含量低的、生理波動范圍大的,樣品用量較大。如Trinder反應測定血清葡萄糖、膽固醇等,樣品試劑比例多為1:1OO,測定血尿酸或高密度脂蛋白膽固醇,常增加為1:50;ALT和AST的樣品試劑比例多為1:1O至1:20。方法靈敏、吸光度高的實驗方法,樣品試劑比例小,如白蛋白BCG法,樣品試劑比例常為1:200。肌酐Jaffe氏法監測時間短、吸光度值較低,樣品試劑比例多為1:10。一般應以試劑說明為準,不宜輕易改動。
(1)改動樣品試劑比例,影響一系列方法學參數。若比例增大,則線性范圍縮小,線性反應時間縮短,樣品內源性干擾、基質效應增加、旁路反應會增強,方法特異性也下降。若比例減少,檢測信號偏低,信噪比(噪音/信號)增大,當儀器精度不高時,會加大測量誤差。
(2)改動樣品試劑比例,對某些反應有影響。如堿性磷酸酶(AI_P),有文獻報道:當樣品試劑比例從1:25降至1:50時,酶活力測定值增加,再低于1:50時不再增加。這一效應可能是較高稀釋度下AIJP多聚體解聚的結果。體液樣品稀釋也可能對測定結果產生影響:④大多數蛋白質在濃溶液中的分子構象比稀溶液中穩定,樣品稀釋可影響酶的穩定性。(2)降低樣品中內源性抑制劑或激動劑的濃度,如以蒸餾水稀釋血清,可能因降低血清中淀粉酶的激動劑氯離子的濃度,致測定淀粉酶結果偏低;隨血清稀釋倍數增加,肌酸激酶測定活力增加,可能與降低樣品中AMt,、胱氨酸等內源性抑制劑有關。
(3)雙試劑時要兼顧R1、R2和樣品三者的比例,尤其不宜改動試劑間的比例。R2要考慮儀器規定的加液最小體積,同一試劑瓶死體積下分液量小而浪費大的經濟問題等。
4.稀釋(水)量在加樣或加試劑時,加入去離子水或可以指定的液體。它的主要用途有兩個。一是用于濃縮試劑的稀釋,或樣品、校準品的稀釋。二是在樣品加量小的時候用來沖洗樣品探針,減小攜帶誤差;但用量不宜太多,以免稀釋試劑影響反應。要把稀釋水量納入樣品試劑比例和反應液總體積考慮。必要時,干粉試劑復溶也要考慮此因素。