生化分析儀試劑空白監測參數如何設置?
加入時間:2014-05-14 15:40:50 當前新聞點擊率:3334
生化分析儀在檢測前,無樣品或以水代替樣品在反應過程中觀察試劑空白值或其變化情況,主要用于監測試劑質量及醫療設備的穩定性,利用試劑空白對試劑本身或反應漂移引起的誤差進行補償,用以校正△A或△A/min。它與測定波長、光徑大小、不同試劑及配方和樣品試劑比例等有關,不能盲目套用,必要時宜實際測定。
1.試劑吸光度上限和下限定點監測試劑的吸光度。它常用規定波長及光徑下的吸光度值表示。儀器的試劑空白檢測點因儀器和測定方法的不同而有差異。終點法常在PO點讀數,連續監測法常以反應監測起始點來判讀。儀器在試劑空白檢測及相關的校準測定時,若監測到超過此參數的限值,則提示試劑失效或校準無效。反應吸光度向上的試驗取上限值:如Trinder反應以酚或2-羥-3,5-二氯苯磺酸等和4-氨基安替比林作用,生成紅色色素,試劑有一定的自發氧化,其試劑一般要求試劑吸光度上限≤0. 1-0. 4。以結合型硝基苯衍生物作為底物的ALP和GGT常要求≤0.6~0.8。反應吸光度向下的試驗取下限值:如以NADH或NADPH為輔酶的ALT和Urea(紫外法)等試驗,一般要求試劑吸光度下限≥1.0。
2.試劑空白速率顧名思義,它是在反應過程中對試劑空白的變化速率作連續監測,其數值在樣品測定結果中自動扣除。試劑中可能混有的其他雜酶或干擾物對試劑空白速率有影響。在酶促反應中,試劑空白速率也是試劑在監測過程中底物自發降解的結果。底物為還原型輔酶者,本身不穩定而分解,多呈下降趨勢;以硝基苯酚或苯胺的衍生物作底物,在堿性環境中自發水解成被測物質,多呈上升趨勢。此參數主要用于連續監測法。一般認為酶活性測定的試劑空白速率(△A/min)應≤0. 001~0.003。由于試劑空白速率與儀器檢測下限、正常參考范圍下限等指標有關,有時也以濃度單位表示。要根據K值、儀器穩定性、方法允許變異而定。例如,ALT或AST40U/L以下活力濃度的分析誤差應≤10%,其試劑空白速率應≤4.0U/L。一些儀器的程序參數中沒有此參數,但我們應在試劑空白的測定資料中關注它,若資料波動大,須查找試劑或儀器原因。
3.試劑空白的日常監測測定方法設置了試劑空白的項目,都要先行作試劑空白測定,在樣品測定計算中自動扣除。由于試劑空白不是在每一個樣品測定中實時測定并扣除,當樣品測定中試劑的變化在未達到參數設置限值時不易發現,試劑空白扣除會產生誤差。所以,應根據試劑的穩定性確定試劑空白及相關的校準的測定頻率。連續監測法的試劑應每天(尤其在換另瓶或另批號試劑時)常規測定此參數。對樣品的異常結果.也應及時對其測定吸光度資料(包括與試劑空白有關的資料,例如PO點讀數)觀察分析。
4.有的半自動生化儀沒有試劑吸光度上限和下限設定,但一般在測定屏幕都顯示初始吸光度值,應人工加以判斷。酶活力測定結果呈負值,有時可能與試劑空白錯誤有關。
5.試劑吸光度上限和下限不是試劑質量的唯一指針。因此,一定的校準頻率和室內質控是質量保證的必需手段。我們在實際工作中就遇到酶活力測定的試劑空白數據在規定限值內,但質控物測定結果連續偏低,病人結果因每天標本少而難以判斷,最后發現是試劑質量下降。