多功能酶標儀如何進行靈敏度和正確度的監測?
加入時間:2014-06-10 11:35:51 當前新聞點擊率:3500
現階段的酶標儀在我國各醫院及科研單位的應用已經非常廣泛,目前可用于多種疾病及物質檢測,如三氯氰胺等。為有效保證檢測數據的準確性,醫療設備的靈敏度是非常重要的,那么多功能酶標儀如何進行靈敏度和正確度的監測?
方法:①靈敏度:精確配制6 ug/ml重鉻酸鉀(干燥)溶液(0.05 mo1/L硫酸溶解),加進200 ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中,以0.05 mo1/L硫酸溶液作空缺,于450 nm(參比波長650 nm)測定,其吸光度應≥ 0.01 A。②正確度:正確配制:1mmo/L對硝基苯酚(提純品)水溶液,然后以10 mmo1/L氫氧化鈉溶液25 倍稀釋之,加進200 ul稀釋液于小孔杯中,以10 mmo1/L NaOH溶液作空缺,于405 nm(參比波長650 nm)檢測,其吸光度應在0.4 A(0.395~0.408 A)左右。
醫療設備的靈敏度和正確度主要受兩個因素影響:一是濾光片波長的精度,二是檢測器的質量。通常情況下,濾光片原因導致儀器的靈敏度和正確度下降比較輕易檢查;而檢測器質量差異則不易被發現,因此我們采用上述兩種標準物質溶液對儀器檢測器的質量進行定期監測,從而保證了儀器檢測結果的可靠性。對于儀器正確性的測定,我們采用了文獻報道的方法,經過多次在不同型號儀器間進行反復測定,結果發現該標準物溶液在450nm波優點有一較為恒定的測定值,由于酶標儀與其它分光光度計的光學原理不完全相同,故是否可以作為評價酶標儀正確性的參考方法還有待同行進一步研究考證。
通道差與孔間差檢測
方法及其表達方式:①通道差檢測:取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染)以酶標板架作載體,分別加進三種不同濃度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8個通道的相應位置,蒸餾水調零,采用雙波長(測定波長490nm,參比波長630或650nm,以下均相同)連續測三次,觀察其不同通道之間丈量結果的一致性可用極差值來表示其通道差。②孔間差的丈量:選擇同一廠家、同一批號酶標板條(8條共96 孔)分別加進200 ul甲基橙溶液(吸光度調至0.065~ 0.070 A)先后置于同一通道,蒸餾水調零,采用雙波長檢測,其誤差大小用±1.96s衡量。
理論解釋:為了進步酶標儀的檢測速度,根據 96孔酶標板的規格特點,目前大多數廠家的中、高檔酶標儀均采用8通道的檢測器(部分中、低檔酶標儀目前仍采用單通道).因而它們每個通道的檢測能力是不盡相同的,它是儀器內部的固有誤差,與所測溶液濃度成正相關(不同檢測器對不同濃度溶液的響應能力不同),所以通道差是衡量酶標儀性能良好與否的重要指標之一;其衡量指標用極差表示,這與廠家推薦的指標是一致的;極差值越接近于零,通道差越小,說明同一樣品于不同通道檢測結果的一致性越好。