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              酶標儀的試驗法(ELISA)原理是什么?
              加入時間:2012-09-07 14:21:35  當前新聞點擊率:4178

               我們到醫院去拍片所用到的那些儀器設備都有它的工作原理所在,如果工作人員了解了這些醫療器械的工作原理就能更好的運用儀器。還能幫助工作人員更好的完成工作。酶標儀是我們生活中應用的非常廣泛的醫療設備,下面就酶標儀的免疫吸附試驗的基本原理講解一下:

              ()將過量特異抗體(或抗原)包被于載體(酶標板)上,通過抗原抗體反應使待側物質(抗原或抗體)和酶標記物(用HRP-辣根過氧化物酶標記的抗體或抗原)也結合在載體上(固相分離),經洗滌去除游離的酶標記物后,加入底物,已經結合在載體上的標記酶促使底物顯色。最終利用光電比色法,對待測物進行定性判斷或定量測定。

              以上方法的檢驗靈敏度可以達到ng/ml水平。

              (二)包被酶標板:將特異抗原溶液加入酶標板孔內,4℃過夜。然后用洗滌液洗滌35次(洗板機洗板),這樣溶液中的特異抗原被牢固吸附在酶標板的微孔表面,形成固相抗原,殘液及雜質被清洗掉。

              (三)入被測樣本液(病人血清)樣本液中含有待測抗體,經過溫育反應,則與已包被的抗原產生特異結合,生成包被抗原與待測抗體的復合物,被吸附在酶標板的微孔表面。然后再次進行洗滌,去除殘液及干擾物質。

              (四)加酶結合物經過溫育反應,生成包被抗原待測抗體酶標抗原的三者復合物,同樣被吸附在微孔表面,然后再次洗滌,去除游離的或非特異沾附的酶結合物(洗板)。

              (五)加顯色液經過10分鐘20分鐘顯色反應,被吸附的復合物中的酶與顯色底物液生成有色溶液。此時,由于游離或非特異吸附的酶已被清除,所以溶液顏色的深淺,僅決定于已與待測物結合的酶的量,因此能真實反映待測物的濃度。被固化的酶越多,顯色就會越深,這就說明待測物濃度越大。

              (六)加終止液終止顯色反應。

               使用酶標儀檢驗:完成顯色的酶標板放在酶標儀儀器上進行光電比色檢驗,儀器分別檢測空白孔、陰陽性對照孔、標準孔、質控孔和患者樣本孔的吸光度值,并自動按程序要求計算出患者樣本中待測物的濃度或進行定性分析。

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