一、通過血細胞分析儀對血小板計數方法的評價與意義

    關于免疫法和二維法這兩種方法的準確性，各有關作者均作過詳細的實驗對比和評價。Harrison等分析了血小板數在4-794×109 /L的87份標本，用FCM（下稱免疫學法）計數并與參考（手工）方法和二維激光散射法（用Advia 120型儀器），以及以為基礎的儀器等作了對比，結果血小板數>100×109 /L的標本，免疫方法與參考方法和各類均有很好的相關性，相關系數r2=0.98-0.99;但血小板數<100×109 /L的標本，免疫學方法與三種的相關系數r2=0.87，0.90和0.91，而與血液細胞分析儀的相關系數r2仍達0.96。表明在血小板減少的標本，免疫學方法與二維激光散射法有較高的一致性，而與阻抗法相差較大。該作者遇見一份重度的 脂血癥標本，用三種阻抗法計數，血小板分別為135、103和193×109 /L，而用免疫法計數，僅為43×109 /L，用血液細胞分析儀為59×109 /L。Gill等在儀器上，以抗 CD61熒光標記法計數血小板，并與一般的光散射法和阻抗法對手工參考方法進行了比較，結果熒光單抗法與參考方法的相關系數r2=0.97，光散射法與參 考方法的相關系數r2=0.94,阻抗法與參考方法的相關系數r2=0.85。在精密度方面，也顯示免疫法的優越性。

    Kunicka等對二維激光散射法計數血小板的準確性，也進行了詳細的比較和評價。Kunicka等將260份血小板在2-1000×109 /L的血樣標本將本法與手工參考方法比較（手工法是由二名有經驗的技師各計數一塊血細胞計數板的兩個計數室，以總平均數報告），其相關系數 r2=0.975；而與 一維法（即和一般 的光散射法）的相關系數r2=0.886。值得指出的是，在重度貧血、白血病、MDS、DIC和各種血小板減少的病例，經常出現NPPs，手工法和各種一 維法計數結果往往偏高。Kunicka等出了100份血小板低于50×109/L的血樣，將二維法與手工法進行比較，結果相關系數r2=0.833，遠低 于血小板數正常的標本。Chapman等用Advia 120 的二維儀器計數血小板，認為它有很高的準確性，可減少65%的人工復查率（review rate ）,從而節省了可觀的經費。
    除了各種非血小板顆粒的存在，使血小板計數偏高以外，大血小板和血小板聚集（clump）的存在，是導致阻抗法和一般光學法計數偏 低的主要原因。它們往往因為體積過大而被當作紅（白）細胞加以計數。在染色的血涂片上，由血球儀研究：一般正常血小板的直徑在1-4μm，Gill等將血涂片上的大型血 小板，分為大血小板（macrolpatelet,直徑4-6μm）和巨血小板（giantplatelet,直徑6μm以上）兩類，在Advia 120儀上，將體積在20fL以上者，定為大血小板，并報告其數量。關于大血小板的參考值及臨床義，目前報道尚少，值得進一步研究。

    二、存在的問題

    盡管免疫法和二維法有很多優點，但還不能說已盡善盡美。

    免疫法  無論是FCM還是用CELL-DYN儀計數，都要用昂貴的熒光標記單抗和高檔的血液分析儀器，以及較繁瑣的前處理，故僅適用于特殊的病例或用于方法和校準儀器，難 以在常規工作中普遍推廣。此外，有些血小板膜糖蛋白先天缺陷的患者（如Glanzmann 血小板無力癥），因膜上不表達CD61等抗原，就不能用免疫法計數。

    二維法  盡管它不需特殊試劑和儀器，對NPPs特別是對大血小板的分辨力強，但對白細胞碎片與血小板的鑒別能力如何，尚研究不夠。這些碎片，大小可能與血小板相 似，但折射率是否像紅細胞樣有區別還不太清楚。此外，本法區分聚集的血小板的能力，顯然不及免疫法。由于血小板聚集過程需要鈣離子，因此用除鈣的抗凝劑抗 凝分混勻血液（和制血涂片），一般不會出現血小板聚集。但應注意有極少數的人的血小板，在用EDTA抗凝時，反充會出現聚集。這種依賴EDTA的血小板聚 集現象，有人稱其為“EDTA聚集者（EDTA Clumper）”,此時只能換用非EDTA抗凝劑（如枸櫞酸鈉）進行計數。通常所謂的血小板聚集，是指血小板與血小板之間互相粘附，此時一般血液分析儀 會將其誤認作紅、白細胞而加以計數，導致血小板計數偏低。另有一種現象是血小板粘附于白細胞上，稱為”血小板衛星現象（platelet satellitism）”,亦會使血小板假性偏低。

    間接法  目前用于評價血小板計數準確性的“參考方法”是手工法，其本身不但精密度較差，而且在鏡下也往往難以準確辨別血小板與某些NPPs，準確性也不夠高，但又 沒有可代替的更好的方法。為了驗證和比較各種方法的準確性，Kunicka等提出，增加一項在血涂片上間接計數血小板的方法作為補充。該法是用抗凝血液推 一血片，經氏染色后，在厚薄適中處計數1000個紅細胞并同時計數所見到的血小板，求得血小板/紅細胞之比值。再將此比值×紅細胞數（通過一般血細胞分析儀數得），求得血小板數。此法雖不十分精確，但可以從另一側面，直觀地“間接”計數血小板，還可觀察血小板的大小、形態、有無聚集及聚集體大小等等，是一種 簡單、易行的方法。

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